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PEG8000浓缩病毒注意事项 新手病毒纯化中peg6000沉淀不能溶解,求教

浏览 1276次发布时间:2024-05-06 

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新手病毒纯化中peg6000沉淀不能溶解,求教

peg8000溶液直接水溶解
溶解性口诀
钾钠铵盐溶水快 ,①
硫酸盐除钡铅钙携液敬.②
氯化物溶氯化银,
硝酸盐溶液都透明.③
口诀未皆沉.④
溶解性口诀二
钾、钠、铵盐、硝酸盐;
氯化物除银、亚汞;
硫酸盐除钡铅;
碳酸、磷酸盐,溶钾、钠、铵.
溶解性口诀三
钾钠铵硝皆溶、盐酸盐溶银亚汞;
硫酸盐溶钡铅、碳磷酸盐溶.
数酸溶碱少溶、钾钠铵钡溶
溶解性口诀四埋圆
钾、钠、硝酸溶,(钾盐、钠盐硝辩慎酸盐都溶于水.)
盐酸除银(亚)汞,(盐酸盐除氯化银氯化亚汞外都溶.)
再说硫酸盐,容钡、铅,(硫酸盐溶硫酸钡硫酸铅.)
其余几类盐,(碳酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、硅酸盐硫化物)
溶钾、钠、铵,(相应钾盐、钠盐铵盐溶)
说碱类,钾、钠、铵钡.(氢氧化钾、氢氧化钠、氢氧化钡氨水溶)
另几种微溶物,单独记住.
溶解性口诀五
钾钠铵盐硝酸盐
完全溶解困难
氯化亚汞氯化银
硫酸钡硫酸铅
沉淀记间
氢硫酸盐碱类
碳酸磷酸硝酸盐
溶钾钠铵

PEG促进细胞融合的注意事项有那些?

(1)事先做好卖塌两种原生质体融合的识别标记,如色素、缺陷型、抗性标记等。
(2)原生质体或细胞密度应在105个/ml,两种原生质体或细胞按1:1等量混合
(中晌圆3)PEG诱导融合的效果,同分谨亏子量大小及浓度高低密切相关。分子量和浓度愈大,促进细胞融合的能力愈高,而其粘度及对细胞的毒性也随之增大,故通常以选用分子4000-6000浓度30-50%的PEG进行融合为宜。
(4)PEG使细胞融合或致死剂量界限很狭小,为达到成功有效的融合,还必须严格掌握PEG的处理时间。一般加入PEG后,24℃培育10-20min(注意时间宜短不宜长,过长使原生质体周围包裹一层膜形成凝集体,降低融合率),缓缓加入高钙离子溶液15min后用冲洗液清洗,离心收集细胞或原生质体。

聚四氟乙烯浓缩分散液有毒吗

不超过340度以上,基本无毒,这个跟它的熔点和挥发点有关,常温下聚四氟乙烯浓缩液,聚四氟乙烯成分无毒,但是里面的稀释液是有些毒性的,吃下去对人体是不好的,但是一般吸入少量没事,跟上油漆差不多的

病毒浓缩方法有哪些?哪种方法病毒蛋白损失少?

PEG6000沉淀结合差速离心
蔗糖沉淀
超速离心
具体看病毒大小和密度,改进试剂的浓度,我也在找

genview的peg8000能用来浓缩病毒吗

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关于病毒纯化

病毒为什么一定要纯化?

(1)病毒培养液中含有大量杂质,包括缺损颗粒、病毒外壳、细胞毒素、培养基、血清以及细胞碎片等,这些杂质若被注入动物体内,会引起宿主强烈的免疫反应;

(2)纯化有利于病毒悬浮于体内注射的缓冲液中。

病毒纯化的原则: 以保持病毒的生物活性和感染性为前提,去除非病毒杂质,提取出高纯度的病毒。

病毒纯化方法

1. 超过滤法: 利用超滤膜将水、盐和小分子滤除,将大分子或病毒等颗粒截留,从而达到纯化的目的,该方法主要用于大容量病毒样品的浓缩,且回收率高。常用的超滤膜是硝酸纤维素滤膜。

注意:超滤膜孔径一定要比病毒颗粒小,且只能去除比病毒小的细胞碎块

2. 吸附法: 利用病毒颗粒或杂质的表面离子与吸附剂之间的亲和作用,将病毒或杂质吸附后,用一定的盐溶液将病毒或杂质洗脱下来。常用的吸附剂有红细胞、磷酸钙、离子交换树脂等。

注意:吸附剂应有较大的表面积和吸附能力,性质稳定并便于洗脱

3. 层析法: 利用物质中各组分的理化性质差异,使各组分在固定相和流动相中的分布程度和移动速度不同,从而达到分离的目的。常用的层析法有凝胶层析法、离子交换层析法和亲和层析法。

(1)凝胶层析法:样品流经具有一定孔径大小的多孔葡聚糖凝胶时,各组分按分子的大小不同而被分离。常用的凝胶有磷酸钙凝胶、氢氧化锌凝胶和焦磷酸镁凝胶。

(2)离子交换层析法:在一定pH条件下,利用病毒颗粒所带电荷不同实现分离。适用于所有带电荷的样品的分离纯化。

(3)亲和层析法:利用样品与基质之间的特异性亲和力,实现分离。适用于纯化生物大分子。

4. 离心法: 根据物质的沉降系数或浮力密度的不同,利用离心力将物质分离纯化。常用于病毒纯化的方法有差速离心法和密度梯度离心法。

(1)差速离心法: 利用不同大小和比重的粒子的沉降速度不同,去除宿主细胞碎片等杂质,最后使病毒沉淀。该方法能迅速处理大量样品。

(2)密度梯度离心: 利用超速离心,将病毒颗粒分配到密度梯度介质中相等密度层中,吸出目的颗粒所在介质层,即可到达分离纯化的目的。常用的介质有氯化铯和蔗糖。

5. 沉淀法: 利用悬浮液中的病毒颗粒在重力作用下产生沉降作用,达到分离纯化的目的。用于病毒纯化的方法有聚乙二醇(PEG)沉淀法、等电点沉淀法和中性盐沉淀法等。

(1)聚乙二醇(PEG)沉淀法: 利用聚乙二醇与病毒颗粒形成多聚体,再离心即可沉淀。

(2)等电点沉淀法: 利用病毒粒子在等电点时,所携带的正负电荷相等,分子间相互作用减弱,溶解度降低,从而发生沉淀。

(3)中性盐沉淀法: 利用高浓度的中性盐使物质的溶解度降低,从而发生沉淀。

6. 电泳法: 利用病毒带电粒子在电场作用下,向着与电性相反的电极的移动速度不同,将组分分离成狭窄的区带,最后收集病毒区带部分。

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